BV2 mikroglial hücrelerinde LPS ile indüklenen inflamasyonda oluşan sitokin değişimlerinin tespit edilip, CRP ve kininogen-1'in deiminasyonunun western blot ile araştırılması
Yükleniyor...
Dosyalar
Tarih
2023
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Necmettin Erbakan Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
Nörodejenerasyon; prevalansı hızla artan ve tedavide güçlükler yaşanan birçok nörodejeneratif hastalığın ortak özelliğidir. Posttranslasyonel modifikasyonlardan biri olan deiminasyon (sitrülinasyon) inflamasyona bağlı olarak meydana gelebilir ve bu modifikasyondan Peptidil arjinin deiminaz (PAD) enzimleri sorumludur. Bu çalışmada BV2 mikroglial hücre hattına nöroinflamasyon oluşturmak için LPS uygulaması yapıldı ve sitokinlerden IL-1β'da anlamlı artış gözlemlendi. PAD2, hedeflediğimiz proteinler olan CRP ve Kininojen'deki değişimi belirlemek için RT-PCR yapıldı. PAD2 ekspresyon seviyesinde istatistiksel olarak anlamlı bir düşüş gözlendi. Fakat Kininojen ve CRP ekpresyonunda anlamlı bir değişiklik olmadı. Deimine proteinlerin tanımlanabilmesi için F95 antikoru ile Western blotlama yapıldı. CRP için beklediğimiz bölgede bant saptandı ve CRP'nin deiminasyon adaylarından biri olabileceği görüldü. PAD ekspresyon seviyesindeki düşüşe rağmen çeşitli protein gruplarında deiminasyon tanımlandı. Bu durum daha çok enzimin aktivitesi ile bağlantılı olarak görülmektedir.
Neurodegeneration; It is a common feature of many neurodegenerative diseases, the prevalence of which is rapidly increasing and the treatment of which is difficult. Deimination (citrullination), one of the posttranslational modifications, may occur due to inflammation, and Peptidyl arginine deiminase (PAD) enzymes are responsible for this modification. In this study, LPS was applied to the BV2 microglial cell line to create neuroinflammation and a significant increase in IL-1β, one of the cytokines, was observed. RT-PCR was performed to determine the change in PAD2, the proteins we targeted, CRP and Kininogen. A statistically significant decrease in PAD2 expression level was observed. However, there was no significant change in kininogen and CRP expression. Western blotting was performed with F95 antibody to identify deiminated proteins. A band was detected in the region where we expected CRP, and it was seen that CRP could be one of the deimination candidates. Despite the decrease in PAD expression level, deimination was identified in several protein groups. This situation is mostly seen in connection with the activity of the enzyme.
Neurodegeneration; It is a common feature of many neurodegenerative diseases, the prevalence of which is rapidly increasing and the treatment of which is difficult. Deimination (citrullination), one of the posttranslational modifications, may occur due to inflammation, and Peptidyl arginine deiminase (PAD) enzymes are responsible for this modification. In this study, LPS was applied to the BV2 microglial cell line to create neuroinflammation and a significant increase in IL-1β, one of the cytokines, was observed. RT-PCR was performed to determine the change in PAD2, the proteins we targeted, CRP and Kininogen. A statistically significant decrease in PAD2 expression level was observed. However, there was no significant change in kininogen and CRP expression. Western blotting was performed with F95 antibody to identify deiminated proteins. A band was detected in the region where we expected CRP, and it was seen that CRP could be one of the deimination candidates. Despite the decrease in PAD expression level, deimination was identified in several protein groups. This situation is mostly seen in connection with the activity of the enzyme.
Açıklama
Doktora Tezi
Anahtar Kelimeler
CRP, Deiminasyon, Kininojen, Nörodejenerasyon, Western Blot, Deimination, Kininogen, Neurodegeneration
Kaynak
WoS Q Değeri
Scopus Q Değeri
Cilt
Sayı
Künye
Demirel, G. (2023). BV2 mikroglial hücrelerinde LPS ile indüklenen inflamasyonda oluşan sitokin değişimlerinin tespit edilip, CRP ve kininogen-1'in deiminasyonunun western blot ile araştırılması. (Yayımlanmamış doktora tezi). Necmettin Erbakan Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü Tıbbi Biyokimya Anabilim Dalı, Konya.
